Aberracje genetyczne specyficzne dla chłoniaka w komórkach śródbłonka naczyń mikrokrążenia w chłoniakach z komórek B ad

Obecność komórek nowotworowych oceniano w każdym bloku tkankowym na skrawkach zabarwionych hematoksyliną i eozyną, które cięto przed i po skrawkach, które stosowano do hybrydyzacji fluorescencyjnej in situ (FISH), które przeprowadzono na zawiesinach pojedynczych komórek i na 5 grube tkanki o grubości .m. Próbki tkanek z 20 reaktywnych węzłów chłonnych oraz z niewzartego węzła chłonnego w z 14 przypadków chłoniaka grudkowego służyły jako kontrole negatywne w analizach FISH. Wszyscy pacjenci wyrazili pisemną zgodę na zatwierdzony protokół komisji etycznej. Analiza cytogenetyczna
Tabela 1. Tabela 1. Wyniki cytogenetyczne w chłoniakach nieziarniczych o 27 komórkach B i odpowiadających komórkach śródbłonka nowotworowego. W 14 przypadkach (tabela 1) dostępne były świeże próbki guza do analizy cytogenetycznej kultur krótkotrwałych. Metody hodowli komórkowej oraz przygotowania chromosomów i barwienia techniką bandowania Giemsy opisano wcześniej.8
Analiza ryb
W przypadku chłoniaków z limfocytów B (tabela 1) oraz w przypadku zespołu limfoproliferacyjnego po transplantacji nie były dostępne świeże próbki guza. Do analizy FISH wykorzystaliśmy tkankę utrwaloną w formalinie i zatopioną w parafinie. Aby uzyskać wiarygodną interpretację sygnałów hybrydyzacji, korzystaliśmy z analizy zawiesin pojedynczych komórek do analizy cienkich przekrojów.8
Analizę FISH przeprowadzono na komórkach w interfazie za pomocą sond reaktywnych typu dual-fusion z podwójną fuzją (Vysis) dla IGH / BCL2 w dwóch chłoniakach grudkowych, dla IGH / BCL1 w siedmiu chłoniakach z komórek płaszcza i dla IGH / MYC w trzech chłoniakach Burkitta. W chłoniaku z limfocytów B z marginesem zbadano komórki w interfazie za pomocą sond obejmujących MALT1 i IGH.8. W przypadku zaburzenia limfoproliferacyjnego po transplantacji przeprowadzono hybrydyzację z sondami specyficznymi dla centromeru dla chromosomów płci w obu wątrobowe komórki nowotworowe i komórki szpiku kostnego. Dla każdej hybrydyzacji analizowano 500 komórek w fazie międzyfazowej. Wartością graniczną dla diagnozy każdego zestawu sond był średni procent komórek z fałszywie dodatnią konstelacją sygnału plus 3 SD oszacowane przy użyciu próbek tkanek uzyskanych z 20 reaktywnych węzłów chłonnych.
Analiza immunohistochemiczna i analiza ryb
Immunofenotypowanie fluorescencji i cytogenetykę międzyfazową (FICTION), technikę łączącą immunohistochemię i FISH, przeprowadzono na skrawkach parafinowych o grubości 5 .m wszystkich chłoniaków.9 W celu identyfikacji komórek śródbłonka, sąsiednie sekcje barwiono od dwóch do czterech następujące markery komórek śródbłonka: przeciwciało anty-CD31, przeciwciało anty-CD34, przeciwciało przeciwko czynnikowi von Willebranda i lektyna Ulex europaeus (Dako) (tabela 1). W celu kontroli negatywnej komórki T w próbkach tkankowych wybarwiono pod kątem receptora antygenowego komórek T . / . przeciwciałem .F1 (Endogen). Ponadto, w przypadku zaburzenia limfoproliferacyjnego po transplantacji komórki szpiku kostnego barwiono przeciwciałem przeciwko CD5 (Novocastra). Po barwieniu wykonano FISH. Badano tylko komórki śródbłonka mikronaczyniowego, ponieważ jakość sygnałów FISH w dużych naczyniach nowotworowych była niewiarygodna.
Translokację chromosomów oceniano za pomocą dwukolorowych, podwójnie fuzji sond translokacyjnych i dwubarwnych sond przegrupowań IGH (Vysis)
[hasła pokrewne: Mimośród, busulfan, cefepim ]
[patrz też: layman elbląg, apteka silesia wałbrzych, eurotrops ]