Aberracje genetyczne specyficzne dla chłoniaka w komórkach śródbłonka naczyń mikrokrążenia w chłoniakach z komórek B cd

Ponadto, w ośmiu chłoniakach grudkowych i w rozlanym chłoniaku z dużych limfocytów B, sondy dla RB1 (pasmo chromosomowe 13q14), CSF1R (5q33-34), D5S23, D5S721 (5p15), ALK (2p23) i AML1 (21q22) a dla centromerów chromosomów zastosowano 3, 7, 8, 11, 12 i X (Vysis). W przypadku zaburzeń limfoproliferacyjnych po transplantacji zastosowano swoiste dla centromeru sondy dla chromosomów płciowych (Vysis). Analizowano co najmniej 250 komórek śródbłonka na szkiełko. Poziomy graniczne dla wszystkich sond obliczono jak w analizie FISH. Krótka analiza powtórzeń tandemowych
Genomowy DNA izolowano zgodnie ze standardowymi procedurami w próbkach eksplantowanej wątroby i chłoniaka od pacjenta z zaburzeniem limfoproliferacyjnym po transplantacji. Dziewięć loci krótko-tandem-powtórzonych i locus amelogeniny amplifikowano przy użyciu zestawu do amplifikacji PCR AmpFLSTR Profiler i analizowano za pomocą 310 Kapilarnego sekwenatora DNA / Genotypera (Applied Biosystems).
Sortowanie magnetyczno-kulkowe i kultura komórek śródbłonka
Tkanki węzłów chłonnych z próbek trzech chłoniaków inkubowano w 20 mM buforze fosforanowym zawierającym 50 mg kolagenazy H na mililitr w ciągu 30 minut w temperaturze 37 ° C w inkubatorze z wytrząsaniem. Po odwirowaniu osad ponownie zawieszono w mikronaczyniowej pożywce komórek śródbłonka EGM-2MV (Clonetics) i wysiano na płytki Petriego. Po pięciu godzinach usunięto nieprzylegające komórki i dodano świeżą pożywkę do adherentnych komórek. Pożywkę zmieniano co trzy dni. Po 5 do 10 dniach adherentne komórki odłączono od płytki Petriego przez inkubację z 0,25% trypsyną i mM EDTA (GIBCO) i inkubowano z perełkami magnetycznymi, które powleczono przeciwciałem anty-CD31 (Dynal), zgodnie z instrukcjami producenta . Mikrokulki z komórkami wiążącymi były replikowane na płytkach Petriego. Procedurę beading powtórzono po kolejnych 5 do 10 dniach hodowli. Po uzyskaniu stanu sprzed koncentracji komórki ponownie pasażowano i umieszczano na szkiełkach komorowych (Becton Dickinson). Analizę FICTION przeprowadzono po tym, jak komórki urosły do około 70 procentowej konfluencji we wszystkich trzech hodowanych chłoniakach. W jednym przypadku (Przypadek 13) komórki śródbłonka pasażowano jeszcze dwukrotnie i badano za pomocą procedury FICTION po osiągnięciu konfluencji 70 procent. Co najmniej 200 komórek śródbłonka analizowano na hodowlę komórkową. Poziomy graniczne dla wszystkich sond obliczono jak w analizie FISH.
Wyniki
Zespół limfoproliferacyjny po przeszczepie
69-letni mężczyzna z pierwotną marskością wątroby otrzymał przeszczep wątroby od kobiety-dawcy. Cztery lata później, w przeszczepionej wątrobie zdiagnozowano zaburzenie limfoproliferacyjne po transplantacji, sklasyfikowane jako chłoniak rozlany z dużych limfocytów B. Analiza FISH zawiesiny pojedynczych komórek w próbce chłoniaka, przeprowadzona za pomocą sond specyficznych dla centromeru dla obu chromosomów płci, wykazała tylko jeden sygnał dla chromosomu X.
Ryc. 1. Strata chromosomu Y w komórkach chłoniaka i komórkach śródbłonka nowotworu od pacjenta z chłoniakiem po przeszczepie. W panelu A analiza FISH z sondami dla centromerów chromosomów X i Y pokazuje pojedynczy zielony sygnał dla chromosomu X w jądrach obu komórek nowotworowych (białe strzałki) i komórek śródbłonka (żółte strzałki)
[podobne: celiprolol, dekstran, wdrożenia magento ]
[hasła pokrewne: apteka silesia, przychodnia mościckiego tarnów, przychodnia pelplin ]