Cztery dni po iniekcji oocyty utrwalano 3% paraformaldehydem w PBS przez 4 godziny w temperaturze 4 ° C. Sześć mikrometrowych krioprobówek umieszczono na szklanych szkiełkach powleczonych żelem-ałunem, blokowanych buforem PBS zawierającym 0,1% BSA i inkubowano z anty-mysim NCC, rozcieńczonym w buforze PBS zawierającym 0,1% BSA i 0,05% Tween-20 ( 1: 100) w 4 ° C … [Read more…]
Konieczne będą dalsze badania, aby przetestować ten model w bardziej fizjologicznych systemach modelowych. WNK4 postulowano również, aby działał jako przełącznik molekularny (41, 42), ponieważ może hamować aktywność NCC w swoim stanie naturalnym, ale traci tę zdolność w chorobie ludzkiej. Postulowano, że niezidentyfikowany ligand naśladuje aktywność przełączania, która występuje, gdy wprowadzane są mutacje FHHt (41, 42). … [Read more…]
Zdolność WNK3 do stymulacji NCC i zdolność WNK4 do hamowania NCC nie wydają się zależeć od aktywności kinazy WNK, ponieważ koniec karboksylowy każdej kinazy, bez związanej z nią domeny kinazy, generuje efekty podobne do białek pełnej długości. . Sugeruje to, że jednym z mechanizmów, za pomocą których WNK regulują NCC, są ich efekty jako rusztowania … [Read more…]
Jednak kinazy WNK również oddziałują wzajemnie, aby regulować się nawzajem. Wykazaliśmy wcześniej, że WNK1 hamuje działania WNK4 na NCC (15, 21, 22), co sugeruje, że kinazy WNK tworzą kaskadę sygnalizacyjną o ujemnej regulacji (36). Później wykazaliśmy, że wpływ WNK1 na WNK4 zależny jest od aktywności kinazy i że WNK1 i WNK4 mogą tworzyć kompleksy białkowe … [Read more…]
Należy zauważyć, że zakres aktywności NCC jest większy, gdy WNK3 i WNK4 są wyrażane razem, niż gdy WNK3 lub WNK4 jest wyrażany osobno. Rysunek 4 WNK3 i WNK4 rywalizują o regulację NCC. (A) Zwiększenie liczby WNK4 445. 1,222 cRNA odwraca stymulację NCC zależną od WNK3 421. 17743, podczas gdy WNK3 pokonuje hamowanie NCC za pośrednictwem … [Read more…]
Zmutowany WNK4, który powoduje FHHt (WNK4 Q562E) zachowuje swoją zdolność do wiązania z WNK3, podobnie jak martwy kinaz WNK4 D318A. Nieoczekiwanie, WNK3 i WNK4 oddziałują poprzez ich koniec karboksylowy (Figura 3B), podczas gdy WNK1 i WNK4 oddziałują poprzez ich domeny końca aminowego (22). Rysunek 3 WNK3 kojarzy się z WNK4 i WNK1. (A) WNK3 związany … [Read more…]
Biorąc pod uwagę dowody, że wpływ WNK3 na NCC można oddzielić od aktywności WNK3 jako kinazy, byliśmy zainteresowani poszukiwaniem molekularnych podstaw interakcji kinaz WNK. Wcześniej pokazaliśmy, że WNK1 i WNK4 wchodzą w interakcje w celu regulacji aktywności NCC (15, 21, 22), a Cobb i współpracownicy wykazali, że WNK1 może fosforylować WNK4 w obrębie domeny kinazy … [Read more…]
Wyniki są reprezentatywne dla eksperymentów przeprowadzonych w trzech powtórzeniach. (C) Koniec C WNK3 (WNK3 421. 1,743) zwiększył aktywność NCC w sposób podobny do WNK3 pełnej długości. Stymulacja NCC była hamowana przez hydrochlorotiazyd (HCTZ). Ani sam WNK3, ani sam WNK3 421.
Jednym z kardynalnych objawów FHHt jest zwiększona wrażliwość na diuretyki tiazydowe (14), co sugeruje, że kinazy WNK regulują NCC. Wykazano, że WNK4 hamuje aktywność NCC przez zmniejszanie obfitości NCC w błonie plazmatycznej oocytów Xenopus i komórek ssaków (15. 19). WNK1 pośrednio reguluje NCC poprzez hamowanie WNK4, dostarczając poparcie dla hipotezy, że dominującym mechanizmem, według którego … [Read more…]
Patogeneza nadciśnienia pierwotnego pozostaje nieznana, ale tiazydowe leki moczopędne są często zalecane w leczeniu pierwszego rzutu. Ostatnio wykazano, że rodzinne nadciśnienie hiperdamowe (FHHt) powstaje w wyniku aktywacji taksotransferu t-wrażliwego na tiazyd Na-Cl (NCC) przez mutacje w WNK4, chociaż mechanizm tego efektu pozostaje nieznany. Kinazy WNK są unikalnymi członami ludzkiego kinomu, ściśle zaangażowanymi w utrzymywanie równowagi … [Read more…]