pogotowie ginekologiczne poznań 24h

DNA kodujący ludzki FGFR1c został transfekowany do natywnych komórek HEK293 lub HEK293 stabilnie wyrażających KL typu dzikiego lub zmutowanego. Po 48 godzinach transfekowane komórki przemyto jednokrotnie pożywką bez surowicy, a następnie inkubowano z kondycjonowaną pożywką z komórek wydzielających znakowane FLAG FGF23. Po 2-godzinnej inkubacji komórki przemyto i poddano lizie buforem RIPA (Sigma-Aldrich) zawierającym inhibitory proteazy (Complete Mini Tablet, Roche Applied Science). Lizaty komórkowe inkubowano przez noc w 4 ° C z perełkami agarozowymi niosącymi przeciwciała anty-FLAG lub anty-V5 (Sigma-Aldrich). Kulki agarozowe zostały przemyte, a białka poddane immunoprecypitacji analizowano za pomocą immunoblottingu z przeciwciałami przeciwko V5 (KL, Invitrogen), FLAG (FGF23, Sigma-Aldrich), FGFR1 (Cell Signaling Technology) lub FGF23 (33). Podziękowania Jesteśmy wdzięczni pacjentowi za jej udział w tym badaniu. Praca ta była wspierana przez NIH udziela dotacji R01 AR42228 (do MJ Econs), DK63934 (do KE White), DE13686 (do M. Mohammadi), P01 AG18397, T32 AR07581 i T32 DK065549; Trust Irma T. Hirschl (dla M. Mohammadi); oraz finansowanie z inicjatywy Indiana Genomics Initiative (INGEN), która jest częściowo wspierana przez Lilly Endowment Inc. Przypisy Niestandardowe stosowane skróty: 1,25 (OH) 2D, 1,25-dihydroksywitamina D; EGR1, wczesna odpowiedź na wzrost 1; FGFR, receptor FGF; GALNT3, UDP-N-acetylo-P-D-galaktozamina: polipeptyd N-acetylogalaktozaminylotransferazy 3; KL, klotho; PTH, parathormon. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J. Clin. Invest.117: 2684. 2691 (2007). doi: 10,1172 / JCI31330
[hasła pokrewne: kali sentymentalnie chomikuj, glos slupcy, alkadis ]