DNA kodujący ludzki FGFR1c został transfekowany do natywnych komórek HEK293 lub HEK293 stabilnie wyrażających KL typu dzikiego lub zmutowanego. Po 48 godzinach transfekowane komórki przemyto jednokrotnie pożywką bez surowicy, a następnie inkubowano z kondycjonowaną pożywką z komórek wydzielających znakowane FLAG FGF23. Po 2-godzinnej inkubacji komórki przemyto i poddano lizie buforem RIPA (Sigma-Aldrich) zawierającym inhibitory proteazy (Complete Mini Tablet, Roche Applied Science). Lizaty komórkowe inkubowano przez noc w 4 ° C z perełkami agarozowymi niosącymi przeciwciała anty-FLAG lub anty-V5 (Sigma-Aldrich). Kulki agarozowe zostały przemyte, a białka poddane immunoprecypitacji analizowano za pomocą immunoblottingu z przeciwciałami przeciwko V5 (KL, Invitrogen), FLAG (FGF23, Sigma-Aldrich), FGFR1 (Cell Signaling Technology) lub FGF23 (33). Podziękowania Jesteśmy wdzięczni pacjentowi za jej udział w tym badaniu. Praca ta była wspierana przez NIH udziela dotacji R01 AR42228 (do MJ Econs), DK63934 (do KE White), DE13686 (do M. Mohammadi), P01 AG18397, T32 AR07581 i T32 DK065549; Trust Irma T. Hirschl (dla M. Mohammadi); oraz finansowanie z inicjatywy Indiana Genomics Initiative (INGEN), która jest częściowo wspierana przez Lilly Endowment Inc. Przypisy Niestandardowe stosowane skróty: 1,25 (OH) 2D, 1,25-dihydroksywitamina D; EGR1, wczesna odpowiedź na wzrost 1; FGFR, receptor FGF; GALNT3, UDP-N-acetylo-P-D-galaktozamina: polipeptyd N-acetylogalaktozaminylotransferazy 3; KL, klotho; PTH, parathormon. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J. Clin. Invest.117: 2684. 2691 (2007). doi: 10,1172 / JCI31330
[hasła pokrewne: kali sentymentalnie chomikuj, glos slupcy, alkadis ]
Comments are closed.
[..] Artukul zawiera odniesienia do tresci: obdukcja[…]
Takie bóle nie są przyjemne
[..] odnosnik do informacji w naukowej publikacji odnosnie: Astma alergiczna[…]
cierpiącym na przewlekłe bóle brzucha o nieustalonej przyczynie
Article marked with the noticed of: ortodoncja[…]
Moja babcia miała raka płuca