psychoterapia złotoryja

W przypadku niewydolności serca ogólna aktywność LTCC prawdopodobnie zwiększyła się, przyczyniając się do większego profilu dysfunkcji obsługi Ca2 + (30, 31). Tutaj wygenerowaliśmy indukowalną mysz transgeniczną, aby zbadać wpływ trwałego wzrostu aktywności LTCC w inicjacji i progresji niewydolności serca. Podjednostkę a2a z LTCC wybrano do nadekspresji, ponieważ zwiększa prawdopodobieństwo otwarcia kanału i zwiększa przemianę podjednostki a 1c tworzących pory do sarkolemy, powodując w ten sposób większy dopływ Ca2 + (18, 32, 33). Jako reakcję stosowano zmodyfikowany promotor ciężkiego łańcucha miozyny (a-MHC) (34); po skrzyżowaniu z transgenicznymi myszami zawierającymi białko tet-transaktywujące promotor (3-MHCC (tTA), wytworzyło ekspresję swoistą dla serca w sercu, która była regulowana przez podawanie doksycykliny (Dox) i / lub wycofanie (Figura 1A). Przygotowano początkowo wiele linii myszy zawierających. 2a i wyselekcjonowano linie o niskim (3,1-krotnym), średnio (4,5-krotnym) i wysokim (7,4-krotnym) wyrażeniu. 2a do charakteryzacji (figura 1B). Nadekspresja a2a nie powodowała zmian w innych składnikach LTCC, takich jak a1c lub a2 (2, ani nie zmieniały się inne białka manipulujące węzłem Ca2 +, u myszy w 14 tygodniu życia (Figura 1B). Większość późniejszych prac wykonano dla wygody jedynie w liniach o niskiej i wysokiej ekspresji, chociaż myszy o średniej ekspresji wykazywały fenotyp najbardziej podobny do linii o wysokiej ekspresji (dane nie przedstawione). W celu wykazania wiarygodności systemu indukowalnego, Dox podawano linii o niskiej i wysokiej ekspresji krzyżującej się z linią tTA (podwójna transgeniczna; DTG), demonstrując całkowite wygaszenie nadekspresji. 2a (Figura 1C). Figura Generacja indukowalnych myszy transgenicznych o zwiększonej aktywności LTCC. (A) Schemat binarnego indukowalnego układu ekspresyjnego stosowanego do regulacji ekspresji a2a w mysim sercu. tetR, cDNA represora tet sprzężone z VP16 (domena aktywatora); tetO, operator tet; TRE, element regulujący hormon tarczycy. (B) Analiza Western blot poziomów białka. 2a w sercu myszy DTG o niskiej, średniej i wysokiej ekspresji, hodowanych bez Dox (stan indukowany). Poziomy a1c, a2 ^, SERCA2a, PLN i NCX1 pozostały niezmienione. Con, kontroluj myszy transgeniczne tTA. (C) Western bloty wykazujące indukowalną ekspresję a2a u myszy DTG o niskiej i wysokiej ekspresji bez Dox i jego wygaszanie przez 2-3 tygodni podawania Dox. Sam TG, trans . 2a (bez transseparatora tTA kierowcy). Próbki kontrolne pochodziły od myszy transgenicznych tTA. Charakterystyka postępowania z Ca2 + i kurczliwości. Miocyty izolowane od młodych dorosłych myszy DTG o wysokim i niskim wyrażaniu DTG bez podawania Dox miały znacznie większe prądy Ca2 + typu L, transjenty Ca2 + i frakcyjne skrócenie miocytu w porównaniu z kontrolami typu dzikiego (Figura 2, ACH, i dane nie pokazane ). Serca wyizolowane od młodych dorosłych myszy DTG o niskiej ekspresji miały większą kurczliwość w skurczu serca w czynnym preparacie serca, podczas gdy relaksacja nie uległa zmianie (Figura 2D). Wzrost całkowitego napływu Ca2 + obserwowany u myszy DTG był związany ze znaczącym wzrostem aktywności NCX, głównego mechanizmu wypływu Ca2 + w miocytach sercowych, w izolowanych miocytach (Figura 2E). Nie było zmian poziomów mRNA dla SERCA2 lub PLN (Figura 2F). Dorosłe miocyty izolowane z myszy DTG o niskiej ekspresji nie wykazały znaczącego wzrostu rozkurczowego wapnia przy stymulacji 0,5 Hz, chociaż przy wyższych częstotliwościach stymulacji, miocyty DTG wykazywały wyższe poziomy rozkurczowego wapnia w porównaniu z miocytami kontrolnymi typu dzikiego (dane nie przedstawione). Doświadczenia te wykazały, że indukowalna nadekspresja podjednostki P2a LTCC zwiększa napływ Ca2 + i kurczliwość mięśnia sercowego i mięśnia sercowego u młodych myszy
[podobne: melita medical wrocław, nzoz pieczewo, eurotrops ]